Biotium：全光谱CF荧光染料

Biotium的总部位于旧金山湾区，是一家为科学家提供创新荧光解决方案的领先供应商。致力于运用化学原理为生命科学和医学研究中未解决的挑战提供解决方案，本文主要介绍Biotium公司开发的CF染料。

CF染料是一系列高度水溶性荧光染料，跨越可见光谱和近红外光谱，可为蛋白质和核酸等生物分子贴上标签。具有卓越的亮度、光稳定性和信噪比。

CF染料有40多种，稳定性高、亮度高、溶解度高，从蓝色到近红外。

为什么是CF染料？

化学创新

通过特定的化学修饰优化减少染料聚合和提高溶解度，同时减少非特异性的结合和背景荧光(图1)。

Rhodamine染料具有优异的光稳定性和荧光量子产量，对其结构进一步改造优化，可将发射光扩展到远红和近红外(近红外)区域(图2)，仍然保持着高稳定性、亮度和溶解性。以Rhodamine为基础修饰而来的CF 633 和 CF 640R 染料比光谱比较接近的AF647具有更好的稳定性（图3-4）。

优异的近红外（NIR）染料

近红外染料具有卓越的特异性、灵敏度和线性，比传统可见光染料具有重要优势。近红外染料在体内应用中特别有用，因为组织渗透率更高，组织自荧光干扰更少。然而，近红外染料往往由于染料聚合过度和溶解性差而出现亮度有限的问题。此外，许多近红外染料由于硫化而呈高负电荷，导致非特异性结合和更大的免疫原性。

由于新的PEG修改，近红外CF染料限制了分子内部的流动性，进而提高了量子产量和水溶解性，而不会增加过多的电荷。因此，NIR CF 染料比任何其他近红外染料（图5）更明亮、更高光稳定性，并且具有远大于任何其他近红外染料的生物相容性。此外，与其他商品化NIR染料相比，NIR CF染料为western blotting和免疫染色提供了更优越的信噪比（图6）。

无与伦比的多功能性

出色的标记效率

用于生物标记的活性染料通常容易发生水解，从而降低标记效率。重硫化染料，如Alexa Fluor 染料，DyLight 染料和IRDye水解问题尤为严重。相比之下，Biotium 的胺反应 CF 染料具有相对稳定的 SE 形式，比许多 Alexa Fluor 染料更耐水解。因此，CF染料 SE产品具有更高的标记效率，从而为用户提供了更好的价值。Biotium提供的Mix-n-Stain?抗体标记试剂盒中实施并简化了这项技术，提供29 种 CF 染料选择的快速高效的标记，只需 30 分钟，无需纯化。此外，Mix-n-Stain?标记试剂具有无与伦比的多功能性，拥有专利缓冲系统，可耐受常见的缓冲添加剂，包括BSA、明胶gelatin、甘油glycerol、Tris、腹水ascites fluid和叠氮钠azide。

显微镜下超高分辨率

许多出版物信息显示，CF染料为多种方法提供了最佳性能。某些 CF  染料所展示的卓越亮度、光敏度和光化学开关特性非常适合 3D SIM、3D STORM 和其他超分辨率和单分子成像方法。

图7.使用常规宽场显微镜（左）和使用CF 染料标记的STORM（右）进行微管成像的比较。

图8. CF568（左）产生比Cy3b（右）更好的微管图像，3-D STORM显微镜中。图片由加州大学伯克利分校化学学院Sam Kenny和Ke Xu教授提供。

多色灵活性

Biotium 目前提供超过 30 种 CF 染料，跨越可见光、远红和近红外光谱，还有更多染料在开发中。CF染料产品系列包括活性染料、直标和间标抗体、核苷酸nucleotides、链球菌素streptavidin、鬼笔环肽phalloidin、凝集素lectins和其他生物结合。可去官网下载CF  染料手册了解更多。

流式应用相关产品

CF Dyes 对应流式应用时的激发和发射光波长

直标抗体和其他生物标记物

Biotium提供广泛的CF 染料，以及R-PE、APC、PerCP和生物素标记抗体。

1. 多余1000种的单克隆抗体

2. 重组鼠兔单克隆抗体

3. 13种明亮、光稳定的CF 染料

4. 其他R-PE、APC、PerCP、HRP、AP或生物素标记抗体

5. 相匹配的同型对照抗体

6. 不含BSA的纯化抗体可结合Mix-n-Stain?标记试剂盒使用

7.  Anti-Tag 和 Anti-Hapten 抗体

1) Mouse MonoclonalAnti-GFP

2) Rabbit Anti-RFP

3) Rabbit Anti-GST

4) Rabbit Anti-HA Tag

5) Mouse Monoclonal Anti-6X His Tag

6) Rabbit Anti-Myc Tag

7) Rabbit Anti-V5 Tag

8) Rabbit Anti-FLAG Tag

9) Mouse Monoclonal Anti-Biotin

10) Mouse Monoclonal Anti-Fluorescein 

抗体标记试剂盒

抗体标记试剂盒Mix-n-Stain? Antibody Labeling Kits

1. 快速高效的标记，最少的实际操作时间

2. 提供29种 CF 染料、R-PE、APC、PerCP或串联染料

3. 其他标记选项：生物素Biotin和FITC、HRP、AP和GOx

4. 100%产率，无需纯化

5. 标记耐受BSA、明胶gelatin、腹水ascitesfluid和Tris

6. 试剂盒可用于标记低至1微克和高达1毫克的IgG抗体

7. 还提供用于纳米体体的标记试剂盒

图12.CF Dye Mix-n-Stain? 标记流程概览，标记荧光蛋白 (如, R-PE, APC), 复合染料, 和酶的流程有些不同。

图13. Mix-n-Stain? APC 标记CD3，染色Jurkat 细胞，Mix-n-Stain? APC 相比其他类似产品有更低的非特异性结合（粉）和更高的阳性亮度（蓝）。

蛋白试剂盒CF Dye SE Protein Labeling Kit

1. 允许更灵活地进行标记的优化试剂盒

2. 可选择19种CF dye或生物素

3. 包括用于3 x 1 mg纯化标记反应的试剂

4. 包括确定标记程度（DOL）的说明 

细胞分析试剂

1. 细胞活力测定

2. 细胞增殖与细胞周期

3. 凋亡与坏死

4. 线粒体膜电位染料

图14.Biotium提供14种膜不通透的胺基结合死活染料，结合稳定，适用于固定破膜的胞内分析实验。

流式辅助试剂

光谱流式

光谱流式细胞术是一种快速发展的技术，与传统流式细胞术相比，它的复用能力显著增强。传统的流式细胞仪可以检测最多二十几色的多色实验，而光谱流式已经做到40色以上。

Biotium提供的CF染料就有独特的光谱分布，进一步丰富了染料的选用范围，其中活性染料Live-or-Dye?510/550, 665/685, 375/600, 和 615/740可很好地应用于光谱流式。如下SI(相似性)矩阵供参考（Cytek仪器上测得）：

Reference

CF Dyes - Next Generation Fluorescent Dyes for Biological Research (biotium.com)