Mabtech：B细胞激活试剂

为了诱导记忆B细胞分泌可检测量的抗体，需要进行多克隆激活。Mabtech经过广泛的研究和测试，尝试了各种不同的激活组合，最终发现Toll样受体7/8激动剂R848与重组IL-2的组合非常适合这一目的。这种组合能够高效地激活记忆B细胞，使其分泌可检测的抗体。因此，Mabtech开发了专门用于记忆B细胞的激活试剂，以帮助您在ELISpot和FluoroSpot实验中获得最佳结果。

R848和IL-2都是免疫激活剂，能够刺激B细胞的激活和增殖。R848是一种合成免疫佐剂，通过Toll样受体7和8（TLR7/8）激活免疫细胞，包括B细胞。当R848与TLR结合时，它会激活免疫细胞，并刺激促炎细胞因子的产生，从而增强免疫反应。IL-2是一种由活化的T细胞和自然杀伤细胞产生的细胞因子，在免疫反应中通过促进免疫细胞（包括B细胞）的增殖和激活发挥关键作用。R848和IL-2共同作用，可以将记忆B细胞激活为抗体分泌细胞，用于ELISpot和FluoroSpot实验。

记忆B细胞激活步骤:

1. 复溶重组IL-2

向其中加入1 ml PBS，得到1 ug/ml的人IL-2（或0.5 ug/ml的小鼠IL-2），并在室温下静置至少15分钟。涡旋混匀后立即使用，或分装后存储于-20℃。

2. 解冻并洗涤细胞

将冷冻保存的细胞在PBS中解冻并洗涤，然后重悬于新鲜完全培养基中。或者，也可以使用新鲜制备的细胞。

3. 细胞计数与稀释

计数细胞并稀释至每毫升200万细胞，将1 ml细胞悬液加入到无菌的24孔平底细胞培养板的每个孔中。或者，也可以加入到无菌试管中。

4. 制备要加入每个孔或试管中的R848和重组IL-2激活混合液

使最终激活浓度为R848（1 ug/ml）和重组IL-2（10 ng/ml）。例如，对于8孔细胞，制备8 ml激活混合液（并额外准备一些）。需要10 ml激活混合液 = 20 ul R848（1 mg/ml）+ 200 ul IL-2（1 ug/ml）+ 10 ml完全培养基。

5. 加入激活混合液
向每个孔或试管中加入1 ml激活混合液。对于培养板，用无菌水填满周围的空孔。

6. 用铝箔包裹，置于37℃、5% CO?和湿度条件下孵育3-5天。 备注： 经过3-5天的激活后，细胞应在组织培养板底部形成小岛。这是激活成功的好迹象！孵育3-5天后，培养基不应变为亮黄色。如果变为亮黄色，表明培养基的pH值降低，原因是最初加入的细胞过多。这将不利于细胞活性和Ig分泌。

7. 孵育完成后，将细胞重悬，并用温热的完全培养基洗涤两次。  

8. 将细胞重悬至适合用于ELISpot/FluoroSpot的浓度。